La campaña de El profesor Layton y el Nuevo Mundo se pone en marcha un año después de los acontecimientos narrados en El profesor Layton y el futuro perdido. La historia se desarrolla en Steam Bison, una ciudad de Estados Unidos, un mundo nuevo que ha superado incluso a Londres en su rápido desarrollo, todo ello impulsado por la revolucionaria tecnología del vapor. En medio de todo este avance no tardará en producirse un misterioso incidente que implicará a Luke Triton y que pronto obligará al profesor Hershel Layton a viajar hasta Steam Bison.
Level-5 ha acompañado la fecha de lanzamiento de El profesor Layton y el Nuevo Mundo a vapor de un nuevo tráiler y una descripción de los personajes que los jugadores se encontrarán a lo largo de su aventura, incluyendo los dos protagonistas.
- Hershel Layton: un catedrático de arqueología que imparte clase en la Universidad Gressenheller. Es una reconocida autoridad en acertijos y es conocido en todo Londres por resolver misterios. Lleva un año sin ver a Luke, su asistente.
- Like Triton: ha acompañado al Profesor Layton en innumerables aventuras. Actualmente vive en Estados Unidos por motivos familiares, por su pasión por los rompecabezas se mantiene intacta. Su habilidad para resolver enigmas le ha valido el sobrenombre de "Gran Detective".
- Elinora Allinston: la menor de las hermanas gemelas de la adinerada familia Allinston. Se describe como amable y refinada, pero eso no impide que sienta una pasión por los inventos y la mecánica. Repara cualquier tipo de máquina.
- Elida Allinston: la mayor de las hermanas gemelas de la adinerada familia Allinston. Se describe como sabia y responsable. Se comporta con madurez.
- Eggmuffin Sonder: el inventar más conocido de Steam Bison y una figura sin la cual no se explica el rápido crecimiento de la ciudad.
- Bolt Allinston: el hombre más rico de Steam Bison y uno de los responsables de su desarrollo. En la práctica, es el alcalde de la ciudad.
[*/]Bobsley: el sheriff de Steam Bison, un expeditivo hombre de justicia.